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上海奧析UV1901PC紫外分光光度計(jì)細(xì)胞色素C 活力測(cè)定法

更新時(shí)間：2016-08-26 點(diǎn)擊次數(shù)：3455

上海奧析科學(xué)儀器有限公司UV1901PC紫外分光光度計(jì)細(xì)胞色素C 活力測(cè)定法細(xì)胞色素C 活力測(cè)定法

試劑（1 )磷酸鹽緩沖液（0 .2 m o l /L ) 取磷酸氫二鈉

71. 6 4 g ,加水使溶解成1000ml，作為甲液。另取磷酸二氫

鈉27. 6 0 g ,加水使溶解成1000ml，作為乙液，取甲液81ml

與乙液1 9 m l ,混勻，調(diào)節(jié)p H 值至7. 3。

( 2 )磷酸鹽緩沖液（O .lm d /L ) 取磷酸鹽緩沖液

(0. 2mol/L)500ml,加水稀釋至 1000ml,調(diào)節(jié) pH 值至 7. 3。

( 3 )磷酸鹽緩沖液（0.02mol/L) 取磷酸鹽緩沖液

(0. 2mol/L) 100ml, 加水稀釋至 1000ml, 調(diào)節(jié) pH 值至 7. 3。

(4 )琥珀酸鹽溶液取琥珀酸與氫氧化鉀各4. 72g, 加

水使溶解成1 0 0m l,調(diào)節(jié)p H 值至7. 3。

(5 )qinhuajia 溶液取qinhuajia 0. 65g，加水使溶解成100ml

后，用稀硫酸調(diào)節(jié)p H 值至7. 3。

(6 )去細(xì)胞色素C 的心懸浮液取新鮮豬(牛）心2 只，除

去脂肪與結(jié)締組織，切成條，用絞肉機(jī)絞碎，置紗布兜中，

用水沖洗約2小時(shí)（經(jīng)常攪動(dòng)，擠出血色素），擠干，用水洗

數(shù)次，擠干，置磷酸鹽緩沖液（0. Im o l/L )中浸泡約1 小時(shí)，

擠干，重復(fù)浸泡1次，用水洗數(shù)次，擠干，置組織搗碎機(jī)內(nèi)，

加磷酸鹽緩沖液(0.02md/L)適量恰使豬(牛）心浸沒(méi)，搗成勻

漿，離心10分鐘（普通離心機(jī)），取上層混懸液，加冰塊少

量，迅速用稀醋酸調(diào)節(jié)p H 值至約5 . 5 ,立即離心1 5分鐘，

166 .

取沉淀，加等體積的磷酸鹽緩沖液（0. lm o l/L ) ，用玻璃勻漿

器磨勻后，貯存于冰箱中；臨用時(shí)取1.0ml, 加磷酸鹽緩沖

液(0. lmol/L )稀釋至 10ml。

供試品溶液的制備取供試品，加水制成每lm l中含細(xì)

胞色素C 約3mg的溶液。

測(cè)定法取磷酸鹽緩沖液（0.2mol/L)5ml、琥珀酸鹽溶

液1.0ml與供試品溶液0 .5m l(如系還原型制劑，.應(yīng)加人

O.Olmol/L鐵qinhuajia 溶液0_ 0 5 m l) ,置25ml具塞比色管中，

加去細(xì)胞色素C 的心懸浮液0. 5m l與qinhuajia 溶液1. Oml, 加

水稀釋至1 0 m l,搖勻，以同樣的試劑作空白，照紫外-可見(jiàn)

分光光度法（通則0401)，在550nm的波長(zhǎng)處附近，間隔

0.5mn找出zui大吸收波長(zhǎng)，并測(cè)定吸光度，直至吸光度不再

增大為止，作為酶還原吸光度；然后各加連二亞*約

5m g ,搖勻，放置約10分鐘，在上述同一波長(zhǎng)處測(cè)定吸光

度，直至吸光度不再增大為止，作為化學(xué)還原吸光度；按下

式計(jì)算：

細(xì)胞色素C 活力=

化學(xué)還原吸光度

X100%